中文摘要：

肥胖诱导胰岛素抵抗是2型糖尿病的重要原因，但发生机制不祥。本课题在前期工作的基础上提出假说，将进一步阐明CIDEC在肥胖发生及胰岛素抵抗产生中的作用及其分子机制。首先对肥胖患者CIDEC表达与肥胖程度及胰岛素抵抗的相关性进行分析；以肥胖小鼠为模型证明在肥胖第一阶段CIDEC表达随脂肪蓄积逐渐增加，在肥胖第二阶段随胰岛素抵抗程度加重CIDEC表达下调。进一步以人前体脂肪细胞系SW872为细胞模型，采用RT-PCR、 Western Blot、酶联免疫及过脂质体转染过表达等方法，研究CIDEC表达上调促进脂肪细胞增殖分化及脂滴蓄积导致肥胖发病的分子机制；采用SiRNA抑制MAPK-JNK信号转导通路及PPARγ2的转录，研究TNF-a下调CIDEC，促进脂解导致胰岛素抵抗的分子机制。揭示CIDEC通路在肥胖发病以及胰岛素抵抗中的作用机制，为有效控制肥胖及2型糖尿病的发病提供新思路。

结论摘要：

背景肥胖患者的脂肪组织呈低度炎症反应状态，其中炎症因子TNF-α大量释放，刺激脂解，导致游离脂肪酸升高。游离脂肪酸是导致胰岛素抵抗的重要介质。肥胖患者的胰岛素抵抗是2型糖尿病和心脑血管疾病的发生发展的主要原因。CIDEC (Cell death-inducing DFF45-like effector C)是一种新发现的脂滴蛋白，属于CIDE蛋白家族，定位于脂肪细胞脂滴表面，对促进脂质合成抑制脂肪分解至关重要。多种证据表明CIDEC参与炎症因子介导的脂肪分解。TNF-α下调CIDEC的表达，然而CIDEC的表达下调的具体的机制目前尚不清楚。我们的研究目的是明确脂肪组织TNF-α与CIDEC表达关系，阐明这一过程的分子信号通路。研究内容 1．取人内脏脂肪组织，即刻冰冻或固定，用western blot和RT-PCR检测CIDEC、TNF-α、PPARγ的表达，用免疫组化检测巨噬细胞侵润情况，并测定血中胰岛素抵抗的相关指标。 2．利用诱导分化的SW872人脂肪细胞作为细胞模型，在培养基中加入不同剂量的TNF-α作用不同时间。测定培养基上清中的甘油含量作为脂肪细胞脂解指标；利用免疫荧光观察脂肪细胞脂滴形态的变化，并用western blot和RT-PCR检测CIDEC、PPARγ等分子的表达。 3．使用MAPK通路的抑制剂分别阻断下游MEK/ERK、JNK、P38型号通路，观察其对TNF-α作用的影响。 4．在明确MEK/ERK通路之后，转染siRNA分别敲低MEK、ERK的表达，观察其对TNF-α作用的影响。采用双荧光素酶报告基因系统，确认TNF-α对CIDEC转录调控作用。结果在人的内脏脂肪组织中，我们观察到CIDEC的表达在肥胖患者体内表达降低，而TNF-α的表达升高，二者呈负相关关系。随着TNF-α剂量增加作用时间延长，脂肪细胞脂解增加，脂滴减少变小。同时，CIDEC的表达随TNF-α剂量增加，作用时间延长而减少。此外，我们同时观察到TNF-α下游MAPK通路的激活以及CIDEC的转录因子PPARγ磷酸化的增加。MEK抑制剂U0126和GSK1120212均能够逆转TNF-α诱导的CIDEC表达下调，而P38抑制剂SB203580、JNK 抑制剂SP600125则无作用。敲低MEK或ERK均能够阻断TNF-α对CIDEC的表达下调，MEK RNAi的作