中文摘要：

对于遗传疾病的基因治疗，转基因表达长期稳定、宿主免疫反应轻微的转基因载体，是学界孜孜以求的目标。近期发现被公认为安全性最高的重组腺相关病毒（rAAV）载体也存在细胞免疫毒性风险。因其发生机制尚不明确，目前还没有适当的应对策略。本课题提出减少免疫系统抗原递呈细胞，特别是成熟树突状细胞（DC）内转基因表达，是规避转基因产物细胞免疫毒性的有效方法。尽管rAAV转导DC的效率很低，但最新研究发现在一定条件下仍然可以发生。本课题拟将在成熟DC内特异性高表达的miRNA的结合序列引入常规rAAV载体，构建新型rAAV载体。通过在不同来源及发育阶段的DC等细胞内的转基因表达、抗原递呈、T细胞激活、靶细胞杀伤力等系列研究，证明新型rAAV载体可有效降低转基因产物细胞免疫风险，并通过体内实验证明新型rAAV载体甚至可长期表达抗原性极高的转基因产物，为今后rAAV基因药物的临床研究提供安全保障。

结论摘要：

重组腺相关病毒（rAAV）因具有无致病性、低免疫原性、能介导外源基因长期表达、宿主范围广泛等优点，迅速成为最有发展前景的基因治疗载体，但临床研究发现的细胞免疫毒性成为制约其临床疗效的关键。在总结前人报道和自身实验数据的基础上，本课题组认为体内最强大的抗原呈递细胞树突状细胞（DC）应该在rAAV基因载体引起的细胞免疫毒性上发挥主导作用。本课题利用miRNA可以细胞选择性阻断基因表达的特点，选取成熟树突状细胞 (mDC) 内特异性高表达的miRNA，构建含miRNA完全互补结合序列的rAAV载体，选择性阻断转基因抗原在mDC内的表达、加工和呈递，抑制mDC对细胞毒性T淋巴细胞（CTL细胞）的激活，将为避免或减轻rAAV细胞免疫毒性反应的发生提供新的解决方法。实验结果（1）miR-155在mDC中特异性高表达，含miR-155结合序列（miR-155T）的新型rAAV转基因表达可以选择性的在mDC中沉默；（2）新型rAAV可以抑制DC的抗原呈递作用；（3）新型rAAV可以抑制DC对T细胞的激活作用。