中文摘要：

目的：研究增强型绿色荧光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein，EGFP）基因在大肠杆菌中的基因克隆、重组表达及纯化。方法：采用PCR方法克隆EGFP全长cDNA序列，构建原核表达载体pGEX4T-1-EGFP，经过DNA序列测定证实其序列正确，转化大肠杆菌BL21（DE3）pLysS，通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（isopropyl—beta—D—thiogalactopyranoside，IPTG）诱导表达，用谷胱甘肽-Sepharose 4B层析法纯化GST—EGFP融合蛋白。结果：成功地克隆了EGFP全长cDNA序列，并进行原核表达以及蛋白的纯化，GST—EGFP的表达量占菌体蛋白量的40％以上。经纯化后纯度高于90％。菌体超声裂解后上清波及其纯化产物在长波紫外线的照射下，发出明亮的绿色荧光。结论：本研究为应用EGFP追踪细胞吞噬功能等动态活动奠定了实验基础。

英文摘要：

Objective： To study the gene clone, expression and purification of EGFP （Enhanced Green Fluorescent Protein） gene in E. coli. Methods： EGFP genes were cloned to build prokaryotic expression plasmid pGEX - EGFP. EGFP - GSTwere purified with GSTrap FF columns. Results： The EGFP - GST molecular weight is around 53 000D. The EGFP - GST solution after purification show bright kelly. Conclusion： In this study, the experimental foundation for the usage of EGFP in cell actions has been established.