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酵母双杂交筛选与蛋白激酶CK2α′相互作用蛋白——泛素-52氨基酸融合蛋白的鉴定
  • 期刊名称:中国生物化学与分子生物学报
  • 时间:0
  • 页码:1940-1945
  • 语言:中文
  • 分类:Q555.7[生物学—生物化学] R339.21[医药卫生—人体生理学;医药卫生—基础医学]
  • 作者机构:[1]广东医学院生物化学与分子生物学研究所,湛江524023, [2]广东医学院衰老研究所,东莞523808
  • 相关基金:国家重点基础研究发展规划(973计划)项目子课题项目(No.2007CB507403);国家自然科学基金项目(No.30672205);广东省自然科学基金项目(No.05011579);广东省高校自然科学研究重点项目(No.06Z015)和湛江市2006年科技招标项目
  • 相关项目:衰老相关的A型核纤层蛋白前体结合蛋白的鉴定与研究
中文摘要:

蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶.为研究CK2α′亚基在精子发生中的作用机制,将构建于pACT2质粒的人睾丸cDNA文库和人蛋白激酶CK2α′为诱饵蛋白进行酵母双杂交实验.以初步筛选与人蛋白激酶CK2α′相互作用蛋白的阳性候选克隆,筛选获得8个阳性克隆,其中1个与人泛素-52氨基酸融合蛋白基因(UBA52)的cDNA序列有高度同源性(100%).GST pull-down实验在细胞外进一步证实了CK2α′与UBA52之间存在相互作用.本实验证明,人泛素-52氨基酸(UBA52)融合蛋白是人CK2α′亚基的相互作用蛋白,它们之间的相互作用对精子发生机制的影响尚不清楚,进一步分子机制研究正在进行中.

英文摘要:

Protein kinase CK2 is a ubiquitous eukaryotic messenger-independent protein serine/threonine kinase.To investigate the role of CK2 in spermatogenesis,a bait plasmid has been constructed by subcloning the human CK2α′ cDNA fragment into the yeast two-hybrid vector pGBKT7.Both of the bait pGBKT7-HCKα′ and a human testis cDNA library vectors were then cotransformed into AH109 competent cells to screen the interacting protein of human CK2α′ subunit by yeast two-hybrid system.The result showed that eight positive clones were selected for interaction with human CK2α′subunit.One of the potential binding partners showed high homology to human ubiquitin-52 amino acid fusion protein gene(100%).GST pull-down assay confirmed that CK2α′ interacted with human ubiquitin-52 amino acid fusion protein in vitro.The interaction between CK2α′ and UBA52 was demonstrated both in a yeast two-hybrid system and in an in vitro assay.The importance of such interaction in spermatogenesis is unclear.Further investigation is required to address this issue.

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