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猪环曲病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用
  • ISSN号:1673-4696
  • 期刊名称:《中国兽医科学》
  • 时间:0
  • 分类:S852.659.6[农业科学—基础兽医学;农业科学—兽医学;农业科学—畜牧兽医]
  • 作者机构:[1]四川农业大学动物生物技术中心,四川成都611130, [2]四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室,四川成都611130
  • 相关基金:四川省科技支撑计划项目(2014NZ0043); 科技部国际科技合作项目(2014DFA31260); 教育部“长江学者与创新团队发展计划”项目(IRT13083)
中文摘要:

为建立快速检测猪环曲病毒(PToV)的RT-LAMP方法,根据GenBank中发表的N蛋白基因序列,设计合成4条特异性LAMP引物,通过敏感性试验和特异性试验,建立了PToV RT-LAMP检测方法,并对71份临床粪便进行了检测应用。结果显示,本试验建立的PToV RT-LAMP检测方法在65℃60min条件下可扩增出特异性梯状DNA条带,与猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪细小病毒、猪环曲病毒的核酸无交叉反应;检测极限为10copies/μL,比普通RT-PCR的灵敏度高10倍,表明该检测方法具有较强的特异性及灵敏性。用建立的RT-LAMP方法进行的样品检测结果显示,受检的71份样品中有17份检测结果为阳性,该结果与常规RTPCR检测结果吻合,总的阳性率为23.9%。

英文摘要:

To develop a reverse transcription loop-mediated isothermal amplification(RT-LAMP)method for quick detection of porcine torovirus(PToV),4specific RT-LAMP primers were designed and synthesized according to the conserved sequences of N protein gene of PToV published in GenBank,meanwhile its specificity and sensitivity were assessed,and 71 clinical samples were detected using the RTLAMP and RT-PCR in paralle.In result,a ladder like bands of PToV were amplified using the RT-LAMP method,performed at 65 ℃for 60 min.The detection limitation reached 10copies/μL,which was 10-fold higher than that of the traditional RT-PCR;and there was no cross-reaction with PCV2,CSFV,PRV,PRRSV,PEDV,TGEV,PPV and PKoV.PToV positive rate in the clinical samples was 23.9%(17/71).These results indicated a good correlation between PToV RT-LAMP and RT-PCR.

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期刊信息
  • 《中国兽医科学》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中华人民共和国农业部
  • 主办单位:中国农业科学院兰州兽医研究所
  • 主编:殷宏
  • 地址:兰州市盐场堡徐家坪1号
  • 邮编:730046
  • 邮箱:zgsykx@zgsykx.com
  • 电话:0931-8310086 8342195
  • 国际标准刊号:ISSN:1673-4696
  • 国内统一刊号:ISSN:62-1192/S
  • 邮发代号:54-33
  • 获奖情况:
  • 2003年获第二届国家期刊奖百种重点期刊奖
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,美国剑桥科学文摘,英国动物学记录,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:6141