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蛋白免疫印迹法检测小分子蛋白的实验条件优化研究
  • ISSN号:1673-6273
  • 期刊名称:现代生物医学进展
  • 时间:2015
  • 页码:1230-1232
  • 分类:R446.6[医药卫生—诊断学;医药卫生—临床医学]
  • 作者机构:[1]上海中医药大学,上海201203
  • 相关基金:国家自然科学基金项目(8117334;81173332;81202753;81473760);上海市卫生系统优秀青年人才培养计划(XYQ2013081);上海市中医药事业发展三年行动计划重大研究项目(ZYSNXD-CC-ZDYJ039)
  • 相关项目:基于S100A8蛋白功能及其与膜受体RAGE相关性的针刺抗哮喘作用机制研究
中文摘要:

目的:蛋白免疫印迹法自发明以来被广泛应用于现代生物学研究中的蛋白质定性和半定量分析。为了提高蛋白免疫印迹矧的检测效率,需针对不同蛋白的特性调节相关的实验条件参数。本文旨在探讨免疫印迹法不同参数对小分子蛋白检测效果的景响,从而优化并获得最佳实验条件。方法:比较不同转膜电压和时间、转移缓冲液甲醇含量、不同化学发光剂对小分子蛋白的检洌效果。结果:选择20V、10min转膜电压和时间所获得的信号显著高于10V、25min转膜条件,选择含20%甲醇转移缓冲液所宝得的信号显著高于无甲醇转移缓冲液,选择飞克级化学发光剂所获得的信号显著高于纳克级化学发光剂。结论:选用高电压、丧时间组合,选择含20%甲醇转移缓冲液和飞克级化学发光剂信号均有助于小分子蛋白免疫印迹检测。

英文摘要:

Objective: Since the invention of the Western blotting method, it has been extensively applied as a protein qualitative and semi-quantitative analysis method in modem biology research. In order to improve the efficiency of this method, adjustments of the related experimental parameters were needed according to the characteristics of different proteins. Our purpose is to investigate the ef- fects of different parameters of the Western blot in detecting small molecule proteins, thus optimize and get the ideal experimental condi- tions. Methods: Comparing the effects of different transfer voltages and times, different methanol contents of transfer buffer and different chemiluminescence reagents of western blot technology. Results: The signal of small protein obtained at 20 V for 10 min was much high- er than that transferred at 10 V for 25 min. The signal of the 20 % methanol in transfer buffer was significantly higher than that of the 0 % methanol in transfer buffer. The effect of chemiluminescence reagent at femtogram level was superior to that of the nanogram level. Con- clusion: Choosing high voltage and short time, choosing transfer buffer containing 20 % methanol and chemiluminescence reagent at femtogram level could be helpful in the detection of small molecule proteins by using the western blot assay.

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期刊信息
  • 《现代生物医学进展》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:黑龙江省卫生厅
  • 主办单位:黑龙江省红十字医院 黑黑龙江省红十字医院 黑龙江省森林工总医院
  • 主编:申宝忠
  • 地址:哈尔滨市南岗区花园街184号403
  • 邮编:150001
  • 邮箱:biomed_54@126.com
  • 电话:0451-82583800 53658268
  • 国际标准刊号:ISSN:1673-6273
  • 国内统一刊号:ISSN:23-1544/R
  • 邮发代号:14-12
  • 获奖情况:
  • 国内外数据库收录:
  • 被引量:33230