变应原特异性免疫治疗是过敏性哮喘的唯一病因疗法。本课题采用DNA shuffling技术改组尘螨(包括粉尘螨和屋尘螨)的Ⅰ、Ⅱ类变应原基因,分别构建Ⅰ、Ⅱ类变应原基因突变库并大规模测序。利用生物信息学方法分析并捕获突变库中编码含T细胞表位增加而B细胞表位降低的改组序列。将筛选的改组DNA 序列进行表达、纯化,观察其对过敏性哮喘小鼠模型的脱敏治疗效果及相关免疫学指标,评价其免疫调节作用和机理。构建并筛选了Ⅰ类变应原基因的突变库后,发现了一个编码含T细胞表位增加、B细胞表位减少的改组基因(R8),与rProDer f1和rProDer p1相比,R8蛋白与螨性过敏性患者的血清特异性IgE结合力降低(P<0.001);通过对构建的Ⅱ类变应原突变库筛选后,获得了4个具优势T细胞表位、减少的B细胞表位的改组基因,过敏性哮喘小鼠模型的特异性免疫治疗后,与阴性对照组相比,均可提高肺泡灌洗液和脾细胞培养上清中IFN-γ的水平(P<0.05),降低IL-4和IL-17的水平(P<0.05);同时降低了血清中IgE、IgG1a的水平(P<0.05)。
英文主题词DNA shuffling; asthma; bioinfomatics; epitope; specific immunotherapy