通过临床采集不同舌苔患者和正常人正常舌苔者的舌粘膜组织样本,提取mRNA,用基因芯片分析基因表达谱和通过PCR扩增凋亡相关基因,凝胶图像分析比较不同舌苔患者凋亡相关基因Fas、c-myc的差异;用原位杂交技术观察舌粘膜组织样本Fas、c-myc凋亡相关基因的表达;用免疫组织化学方法或流式细胞术观察不同舌苔舌粘膜组织样本的凋亡细胞、表皮生长因子受体(EGF-R)、角蛋白、粘附分子(CD29、CD54、CD106 和E-钙粘蛋白)表达情况。为了更深一步研究表皮生长因子(EGF)与舌苔形成的关系,在实验室进行舌粘膜细胞培养,流式细胞术研究EGF对舌粘膜培养细胞EGF-R、角蛋白、凋亡基因、细胞表面粘附分子表达的影响。通过上述研究可以在基因水平和分子水平上揭示舌苔形成的机制,进一步阐明EGF在舌苔形成中的作用,为中医舌诊方法的现代化、科学化及国际化提供理论根据。
将舌苔研究与基因表达谱、凋亡基因、细胞凋亡、粘附分子、EGF-R、角蛋白表达等结合起来,是一个创新性的研究项目,部分揭示了影响舌苔形成基因表达的规律。研究表明与对照组比较,临床常见五种不同病理性舌苔的患者舌粘膜组织5张表达谱基因芯片有426~689条基因表达差异显著,以Ratio>4或<0.3为标准,全部表达下调的基因有42条,上调基因20条。Real-time PCR定量分析10个基因、HE染色和Fas,c-myc,角蛋白,E-钙粘蛋白,CD29,CD54,CD106,EGF-R免疫组织化学表达均呈不同变化趋势。EGF浓度对Tca- 8113细胞株胞内钙离子浓度升高有一定的影响;EGF促进CD29、CD54、Fas、c-myc、E-钙粘蛋白表达受作用时间和浓度的影响。体外培养人、大鼠、小鼠、兔舌背粘膜上皮细胞的细胞周期和凋亡特点显示人薄白苔舌细胞自然凋亡率随时间的推移明显上升,大鼠自然凋亡规律与人最接近;不同浓度EGF和TGF-α对体外培养舌粘膜细胞具有促进增殖作用。从而得出"舌苔形成与细胞凋亡、生长增殖、黏附、代谢等多种分子和基因相关,舌苔变化可能是多基因联合调控的结果"。