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铁蛋白轻链的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备
  • ISSN号:0258-879X
  • 期刊名称:《第二军医大学学报》
  • 时间:0
  • 分类:Q78[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]郑州大学公共卫生学院职业卫生与职业医学教研室,郑州450001
  • 相关基金:国家自然科学基金(30571552);郑州市科技攻关项目(052SGYS33210);河南省自然科学基金(0611044900).(志谢本研究是在河南省分子医学重点学科开放实验室完成,特此致谢!)
中文摘要:

目的:构建FTL的原核表达载体,获得FTL纯化蛋白,制备抗体,为研究其生物学作用奠定基础。方法:采用基因重组技术将PCR扩增的FTL基因产物与原核表达载体pET30a(+)连接,转化入大肠杆菌BL21(DE3),通过PCR、单双酶切及测序鉴定构建结果,用IPTG诱导蛋白表达,将融合蛋白纯化后,免疫日本大白兔,制备FTL多抗,采用Western印迹法检验抗体特异性。结果:成功地构建了FTL的原核表达载体,经大肠杆菌中诱导表达、镍亲和层析柱纯化,得到较纯的相对分子质量约25800的融合蛋白,免疫日本大白兔后得到多抗血清,Western印迹结果显示此多克隆抗体与FTL蛋白特异性结合。结论:本研究获得FTL纯化蛋白,制备了FTL多克隆抗体,为进一步研究FTL的作用机制及其在肺癌组织中的表达情况奠定了基础。

英文摘要:

Objective:To construct prokaryotic expression vector pET30a-FTL, obtain purified FTL protein and to prepare anti-FTL polyclonal antibody, so as to provide evidence for studying the biological function of the antibody. Methods.. Gene recombination technology was used to link FTL gene (PCR product) and prokaryotic expression vector pET30a( + ) ; the recombinant plasmid was then transformed into E. coli BL21 and the positive clones were identified by restriction enzyme digestion and PCR. Expression FTL protein was induced with IPTG and the expression product was purified. The purified FTL protein was used to immunize rabbits to obtain the antiserum. The specificity of the antibodies was examined by Western blotting. Results: The prokaryotic expression vector pET30a-FTL was successfully constructed and a fusion protein, with a molecular weight of 25 800, was obtained after induction with IPTG and affinity chromatography. The anti-FTL antibody was obtained from the immunized rabbits. The results of Western blotting indicated that the polyclonal antibody had high specificity to FTL protein. Conclusion: We have successfully obtained the purified FTL protein and anti-FTL polyclonal antibody, which lays a foundation for further research on the biological function of FTL and expression of FTL in lung cancer tissues.

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期刊信息
  • 《第二军医大学学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:第二军医大学
  • 主办单位:第二军医大学
  • 主编:吴孟超
  • 地址:上海市翔殷路800号
  • 邮编:200433
  • 邮箱:bxue@smmu.edu.cn
  • 电话:021-81870791
  • 国际标准刊号:ISSN:0258-879X
  • 国内统一刊号:ISSN:31-1001/R
  • 邮发代号:4-373
  • 获奖情况:
  • 2008年被评为首批"中国精品科技期刊"2008年获第二...,2004年获第四届全军医学期刊质量评比优秀奖,2002年获第二届国家期刊奖百种重点期刊奖,2000年获首届《CAJ-CD规范》执行评优活动执行优秀奖,1999年获上海高校优秀自然科学学报评比一等奖,1999年获全国高校自然科学学报及教育部优秀科技期...,1997年获上海科技期刊评比二等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,荷兰文摘与引文数据库,荷兰医学文摘,美国剑桥科学文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:30859