聚合酶链式反应 (PCR)是广泛应用的一种体外扩增基因技术,它是由3个热过程构成基本循环(变性、恒退火过程和延伸过程)。本项目用差示扫描量热技术(DSC),研究了多种水溶液的比热,发现有明显不同的松弛行为;从量热学的角度,用DSC模拟PCR的热过程;研制了适用于 PCR 仪的多点实时微型温度采集仪,对实用的PCR 仪进行检测,发现由于程序设定的温度变化很快,PCR 仪存在着较大的热惯性,导致管内液体的温度与程序设定的之间有着明显的差别;研究了温度变化的不精确性、迟滞性和分布不均匀性;用酶联免疫法和实时定量PCR方法,对乙肝病毒的血清(HBV-DNA)实验,发现当变性阶段的温度过高或过低,或经历的时间过短,均会出现"假阴性"的现象;以带有HBV完整基因组的重组质粒pUC-19作为模板,利用PCR热循环仪,人为地改变PCR循环的变性温度和退火温度,用电泳方法检测其结果,发现变性温度过低,或退火温度过高,均会出现"假阴性"。在一般情况下,没有发现"假阳性"。
英文主题词Polymerase Chain Reaction; PCR; calorimetry; false results; Hepatitis B Virus (HBV)