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荧光定量检测细胞绿色荧光蛋白技术的建立与应用
  • ISSN号:0438-0479
  • 期刊名称:《厦门大学学报:自然科学版》
  • 时间:0
  • 分类:Q786[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]厦门大学生命科学学院,福建厦门361005
  • 相关基金:国家基础科学人才培养基金项目(J0630649),国家自然科学基金(30670408,30572077),福建省自然科学基金(2008J0108)资助
中文摘要:

绿色荧光蛋自是在生化与分子生物学研究领域中普遍使用的一种基因表达报告系统显色物.对于细胞内绿色荧光蛋白表达水平的定量检测,目前尚缺乏一套准确、简便、易行的技术.本文以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,用分子量为25ku的线性聚乙烯亚胺介导进入HeLa细胞并表达.利用多功能酶标仪测定细胞裂解液的荧光强度,结果显示:这种新方法测定的荧光强度能很好反映细胞中EGFP的蛋白表达水平,并在短时间内完成对EGFP表达水平的定量检测.该方法简单有效,且不依赖于大型仪器设备,具有较高的准确性与灵敏度,在实际应用中简便可靠,具有推广应用的意义.

英文摘要:

Green Fluorescence Protein( GFP), a material of reporter gene expression system, was widely utilized in the different fields of biological research. However, it is difficult to quantitatively measure the GFP level of cells in a simple and effective way. In this study, we set up an easy, sensitive and efficient method. Enhanced Green Fluorescence Protein (EGFP) was transfected into HeLa cells by 25 ku linear polyethylenimine. After preparation of cell lysate, the fluorescence intensity of expressed EGFP can be detected by multifunctional microplate reader without the utilization of expensive apparatus. Our results indicated that the new method is highly stable and precise in application and allows sensitive detection of protein level in HeLa cells. It has been well proved that the fluorescence intensity of EGFP is consistent with the protein level in cells.

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期刊信息
  • 《厦门大学学报:自然科学版》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中华人民共和国教育部
  • 主办单位:厦门大学
  • 主编:谢素原
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  • 邮编:361005
  • 邮箱:jxmu@xmu.edu.cn
  • 电话:0592-2180367 2187731
  • 国际标准刊号:ISSN:0438-0479
  • 国内统一刊号:ISSN:35-1070/N
  • 邮发代号:34-8
  • 获奖情况:
  • 多次被评为全国、华东地区、福建省的优秀科技期刊,2001年入选国家新闻出版总署评定的"中国期刊方阵",2003年获国家新闻出版总署颁发的"第二届国家科技...,2006年获国家教育部科技司颁发的"首届中国高校精...
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),美国数学评论(网络版),德国数学文摘,美国剑桥科学文摘,美国生物科学数据库,英国科学文摘数据库,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),英国英国皇家化学学会文摘,中国北大核心期刊(2000版)
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