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产1，3丙二醇温控重组大肠杆菌JM109（pBV220-yqhD-dhaB）的构建

ISSN号：1006-687X
期刊名称：《应用与环境生物学报》
时间：0
分类：Q785[生物学—分子生物学] TQ923[轻工技术与工程—发酵工程;化学工程]
作者机构：[1]江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江南大学工业微生物研究中心,江苏无锡214122, [2]浙江经贸职业技术学院应用工程系,杭州310018
相关基金：国家自然科学基金（No.20676053）、国家高科技研究发展计划（863计划,2006AA020103）、江苏省青年科技创新人才（学术带头人）基金（BK2006504）以及长江学者和创新团队发展计划资助（IRT0532）

作者：徐砺瑜[1,2], 唐雪明[1], 沈微[1], 饶志明[1], 诸葛斌[1], 方慧英[1], 诸葛健[1]

关键词： 1, 3-丙二醇, 温控重组, 大肠杆菌, 温控表达载体, 1,3-propanediol（1,3-PD） , temperature control recombinant, Escherichia coli, temperature control expression vector

中文摘要：

1，3-丙二醇（1，3-PD）是一种重要的化工原料，其最重要的用途是作为合成聚酯PTT的单体．由于微生物发酵法生产1，3-PD具有操作简单，不易产生有毒副产物等特点，已得到广泛关注．本研究在前期工作的基础上，分别获得了来源于肺炎克雷伯氏菌的甘油脱水酶编码基因dhaB和来源于大肠杆菌的1，3-PD氧化还原酶同工酶编码基因yqhD，利用温控表达载体pBV220串联构建了重组质粒pBV220-yqhD-dhaB，将其转化大肠杆菌得到产1，3-丙二醇温控重组大肠杆菌JM109（pBV220-yqhD-dhaB）．该重组菌在LB培养基中，30℃好氧培养12h至对数生长中期，再经42℃好氧诱导发酵4h，测得胞内甘油脱水酶和1，3-丙二醇氧化还原酶同工酶的酶活力分别达到260U／mg蛋白和140U／mg蛋白；在含甘油40g／L的发酵培养基中，30oC好氧培养12h至对数生长中期，再经42℃好氧诱导发酵4h，测得发酵液中1，3-PD含量为8．5g／L．这将为进一步构建基因工程菌生产1，3．PD打下坚实的基础．图6表1参18

英文摘要：

1,3-propanediol is one of the most important industrial chemicals for its properties. 1,3-PD production has attracted attention as an important monomer to synthesize a new type of polyester, polytrimethyleneterephthalate（PTT）. Microbial conversion of glycerol to 1,3-PD is particularly attractive in that the process is relatively easy and does not generate toxic byproducts. In our previous study, gene dhaB encoding for glycerol dehydratase from KlebsieUa pneumoniae and gene yqhD encoding for 1,3-propanediol oxidoreductase isoenzyme from Escherichia coli were cloned, respectively. In this study, gene dhaB and gene yqhD were transferred into temperature control expression vector pBV220 to construct a temperature control recombinant E. coli JM109 （pBV220-yqhD-dhaB）. The recombinant E. coli was incubated at 30℃ for 12 h, and then incubated at 42℃ for 4 h under aerobic conditions, the specific enzymatic activities of glycerol dehydratase and 1,3-propanediol oxidoreductase isoenzyme were found reaching 260 u/mg protein and 140 u/mg protein, and the yield of 1,3-propanediol from the fermentation broth with 40 g/L glycerol by the recombinant E. coli could reached 8.5 g/L. This study will provide the basis for further construtting recombinant strains capable of producing 1,3-PD. Fig 6, Tab 1, Ref 18

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