目的 构建人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)真核表达载体pIRES1neo/hGM-CSF,并观察其在人骨髓基质细胞系HFCL中的表达,方法 用DNA重组技术,将hGM-CSF cDNA插入到真核表达载体pIRES1neo的多砍隆位点中,获得阳性重组载体pIRES1neo/hGM-CSF。以脂质体介导法转染人骨髓基质细胞系HFCL细胞筛选获得的阳性细胞用Southern blot和Northern blot方法分别检测其基因组DNA整合和mRNA转录,用ELISA及依赖株(TF-1)法检测其蛋白表达量和活性。结果 酶切鉴定表明成功地构建了重组真核表达载体pIRES1neo/hGM-CSF;hGM-CSF基因已整合到HFCL细胞基因组DNA中,在mRNA和蛋白质水平上均可检测到其表达;hGM-CSF的表